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MTT细胞增殖检测试剂盒
MTT Cell Proliferation Assay
货号 规格 BDXB0004 100次
保存：4℃避光保存，保质期1年
MTT Cell Proliferation Assay 产品概述
MTT全称为3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，汉语化学 名为3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝，是一种黄颜色的染 料。 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臢 （Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的 甲臢，用酶标仪在500-600nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成 的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值）来判断活细胞数量，OD值越大，细胞 活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。
MTT法已经广泛应用于一些生物 活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等领域，它的特点是敏感度高、成本低廉。它的缺点是需要使用有机溶剂，不仅是工作量增加， 也会对实验准确性产生影响。
MTT 细胞增殖检测试剂盒组成
1. MTT试剂：10ml
2. 甲臢溶解液：100ml
需要自己准备的材料
1. PBS（无菌）
2. 细胞培养基（无菌）
3. 96孔板（组织培养级，平底，无菌）
4. 倒置显微镜
5. 排枪
6. 细胞CO2培养箱
7. 酶标仪（含650、570nm滤光片）
使用方法
1. 根据实验目的取不同数量的细胞进行96孔板的铺板（参考值：细胞增殖实验每孔加入 100μl约2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μl约5000个细胞。如有可能，最好先做 预实验，确定细胞铺板的数量）。
2. 待细胞贴壁、生长恢复后，按照实验需要，给予不同浓度的药物刺激等处理。
3. 每孔加入10μl的MTT试剂。（如果细胞培养基体积大于100μl，按比例调整加入MTT试 剂的量）
4. 37℃孵育2-4hr。间或用显微镜观察细胞内沉淀形成情况。
5. 当显微镜下能看到明显的紫色结晶沉淀时，每孔加入100μl甲臢溶解液（包括对照孔）。 勿晃动。
6. 室温（18-24℃）避光放置至少2hr（最长可以过夜）。如果读数偏低，并且紫色结晶溶 解不完全，可以继续放置。（通常室温放置就足够，但37℃有助于加速结晶的溶解）
7. 去盖，将孔板放到酶标仪中，在570nm（或介于550-600nm间的任意波长）测定OD值， 参比波长650nm。
MTT 细胞增殖检测试剂盒 注意事项
1. 实验中必须设立阴性对照。 空白孔的OD值应该在0±0.1之间 未处理细胞的OD值通常应该在0.75-1.25之间
2. 阳性对照也应该设
立。
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